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細胞培養(yǎng)的基本技術(shù)-（培養(yǎng)、傳代、凍存）
來源:
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作者:和諾
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發(fā)布時間: 2014-11-04
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培養(yǎng)基的配置：基礎(chǔ)培養(yǎng)基500ml+胎牛血清50ml+雙抗5ml
凍存液的配置：DMSO18ml+胎牛血清2ml。
依次比例酌量配置。
超凈工作臺常規(guī)配置：
移液器1套（2.5μl、20μl、200μl、1ml），酒精燈1盞，液器1臺，斜架1臺，酒精噴壺1個，酒精棉球缸1個，污缸1個，
常規(guī)耗材：培養(yǎng)瓶（50㎝2），定量移液管（5ml、10ml），槍頭（1ml、200μl、10μl），培養(yǎng)皿，6/24/48/96孔板，醫(yī)用脫脂棉球，保種管
所需試劑：gibco高糖培養(yǎng)基，胎牛血清，雙抗，DMSO，胰酶，苯扎溴氨，75%酒精……
實驗前準備：
所需的各項高壓后的耗材放于超凈工作臺內(nèi)，用酒精噴壺噴灑實驗臺面，并關(guān)閉工作臺打開紫外燈照射30min后開始實驗操作。
首次傳代前細胞的復蘇，首先用一大燒杯盛滿37℃的溫水放于液氮罐旁邊，待細胞株取出后留上端1/3于37℃水面上盡最大速搖動管使其在2min內(nèi)迅速融化。若種管頂部含有凍存的細胞液在搖動期間用力甩動使其降于管底后再搖動。這一過程可在超凈工作臺外操作。